病理制片技術(shù)——常規(guī)染色

2020-9-07 12:5358

蘇木精(hematoxylin)和伊(eosin)染色方法，簡(jiǎn)稱HE染色方法，是生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)與組織學(xué)最廣泛應(yīng)用的染色方法。在病理科稱為常規(guī)染色 方法。病理學(xué)的診斷都是以HE方法為基礎(chǔ)的。染色的目的是把組織切片或細(xì)胞涂片等浸入染料及其他染色劑配成的染色液中，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間和處理，使組織或細(xì) 胞及其他成分染上不同深淺的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，從而便于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察和研究。

進(jìn)行染色前進(jìn)行染色液的配制，應(yīng)根據(jù)工作量的多少配制相應(yīng)量的染液，同時(shí)應(yīng)注意溶液種類的選擇、溶液濃度、pH值等，另外也應(yīng)注意配方的合理選擇。在實(shí)際工作中，應(yīng)做到以下幾點(diǎn)。

• (1)保持染液的清潔，應(yīng)經(jīng)常過(guò)濾或更換。
  (2)染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)組織的種類、染液的新舊及特殊要求而決定。
  (3)染色環(huán)境溫度對(duì)染色效果也有著密切的影響，故染色時(shí)間必須依據(jù)不同條件靈活掌握。
  (4)脫蠟干凈與否對(duì)染色效果有著重要影響，烤片溫度、脫蠟二甲苯的溫度、二甲苯的新舊和二甲苯脫蠟的時(shí)間長(zhǎng)短都與染色有著密切關(guān)聯(lián)。
  (5)標(biāo)本脫水的好壞及固定的充足與否對(duì)染色效果影響極大。
  (6)切片染色后，經(jīng)梯度乙醇脫水，若每步的時(shí)間不足易造成切片發(fā)霧、模糊不清，影響診斷。

在染色過(guò)程中，既要按常規(guī)方法步驟進(jìn)行操作，也應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況、個(gè)人經(jīng)驗(yàn)靈活運(yùn)用，不斷總結(jié)，才能熟練掌握并提高實(shí)際工作能力與效率。

一、人工染色

人工染色已使用近百年，至今還在使用，既古老又實(shí)用。人工染色的設(shè)置因地區(qū)的差異設(shè)置也不同，但大多數(shù)的地方基本一樣。

１．石蠟切片HE人工染色程序(見(jiàn)表8．1)。

2．注意事項(xiàng)

(1)石蠟切片放入恒溫箱中烤片，溫度不可過(guò)低或過(guò)高，以75℃為宜，否則在染色過(guò)程中容易發(fā)生脫片。
(2)組織切片脫蠟要經(jīng)二甲苯三次才能徹底。切片從恒溫箱取出后應(yīng)趁熱浸入二甲苯以利于徹底脫蠟。使用一段時(shí)間后，第一缸二甲苯融的蠟較多應(yīng)倒棄，其后的二甲苯依次前移，最后一缸換新鮮的二甲苯。
(3)切片經(jīng)70％乙醇后入蘇木精染液前，必須自來(lái)水水洗3次，最后1次最好用蒸餾水水洗并控干。這樣可以保證Harris蘇木精染色能力持久，而不會(huì)因?yàn)榈蜐舛纫掖嫉幕旌隙^(guò)早的喪失染色能力。
(4)Harris蘇木精染液配制的好壞直接影響切片染色質(zhì)量。好的蘇木精染液500 ml正常染色能力為2500張左右。為保證染色質(zhì)量應(yīng)及時(shí)更換染液。
(5)蘇木精染液要經(jīng)常過(guò)濾以保證染色清潔而不在切片上有染色渣的出現(xiàn)。
(6)鹽酸乙醇分化液配制參見(jiàn)本書(shū)第十二章。分化時(shí)間可根據(jù)分化液的新舊適當(dāng)調(diào)整，新的分化液時(shí)間短些。分化的目的就是讓該染上要清晰地染上，而不該著色的一定要分化掉。
(7)氨水返藍(lán)液濃度不可過(guò)高，返藍(lán)時(shí)間不可過(guò)高，不要過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)發(fā)生脫片現(xiàn)象。
(8)1％伊紅水溶液是理想的胞漿染液。要選擇好水溶性的伊紅染料使胞質(zhì)鮮艷一些，切片不但漂亮且利于觀片。
(9)切片染色后的脫水要充分，每道乙醇脫水的時(shí)間不要過(guò)短，尤其是三道無(wú)水乙醇更為如此。無(wú)水乙醇要勤更換。
(10)切片經(jīng)最后一次無(wú)水乙醇后盡快地放人二甲苯中。在夏季室內(nèi)濕度較大的環(huán)境中更是如此。如切片在濕度大的空氣中停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)就會(huì)在封片時(shí)產(chǎn)生霧氣， 而不能現(xiàn)片。其原因是無(wú)水乙醇吸收了空氣中的水汽，在二甲苯中難以分離析出，當(dāng)用中性樹(shù)膠封片后，二甲苯揮發(fā)，而水汽留在膠中產(chǎn)生霧氣。
(11)封片所使蓋玻片需大小合適、清潔。樹(shù)膠用量視蓋玻片大小而定，要求不發(fā)生溢膠或缺如。
(12)不提倡切片經(jīng)無(wú)水乙醇，然后干燥，直接用中性樹(shù)膠封固。這樣會(huì)產(chǎn)生人為的細(xì)小黑點(diǎn)，與細(xì)胞核相似。
(13)封片要在通風(fēng)廚中進(jìn)行，防止二甲苯污染工作間，危害技師的身體。

二、自動(dòng)染色機(jī)

自動(dòng)染色機(jī)是近幾年才引進(jìn)的病理自動(dòng)儀器，在病理制片過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，它可以連續(xù)進(jìn)行染色，自動(dòng)記憶，染色效果好，質(zhì)量控制到位。起到了手工無(wú)法比擬的作用。

1．液體設(shè)置：由于機(jī)器為電腦控制，染液順序及液體的設(shè)置根據(jù)染色機(jī)所設(shè)置的染色缸多少來(lái)調(diào)配。染色機(jī)基本模擬手工方法，利用機(jī)器手來(lái)完成操作程序見(jiàn)表8．2。

2．注意事項(xiàng)

• (1)工作前先檢查染液及試劑，并開(kāi)啟電源。
  (2)開(kāi)啟進(jìn)水開(kāi)關(guān)。
  (3)調(diào)試好所需的染色程序，根據(jù)蘇木精一伊紅的新舊來(lái)調(diào)整時(shí)間。
  (4)將切片染色籃放人染色機(jī)后按提示鍵即可按程序進(jìn)行染色。
  (5)聽(tīng)到提示音響后，取出已染好的切片染色籃進(jìn)行封片。
  (6)工作完成后，關(guān)閉電源，關(guān)掉水源，并蓋好染色缸。
  (7)染色機(jī)配制的無(wú)水乙醇及95％乙醇的程序比手工程序少，但不影響染色效果，因機(jī)械手在提升時(shí)有抖動(dòng)作用，帶的液體很少。
  (8)定期取出活性碳過(guò)濾網(wǎng)晾曬保證使用。
  (9)工作結(jié)束后一定要取出鹽酸乙醇，以免長(zhǎng)期放在機(jī)器內(nèi)，腐蝕機(jī)器。